| 规格编号 | 规格 | 市场价 | 会员价 | 数量 | 加入购物车 |
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| HTNP1053 | 100T | ¥225.00 |
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产品简介
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3'...G G G C C C...5'
LightSpeed 系列超快速内切酶是一系列经过基因工程重组、快速、精确完成 DNA 切割的限制性内切酶,适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。LightSpeed系列超快速内切酶具有如下特点:5-15 分钟内即可完成酶切;共用一种酶切 Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,去磷酸化、连接试剂在 EZ 酶切 Buffer中具有 100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接”的体验。
储存条件:-20℃,有效期至少一年
产品组成:
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组分 |
规格 |
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LightSpeed 系列 SmaI
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100μL |
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10× EZ Buffer
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1mL |
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10× EZ Color Buffer
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1mL |
使用方法:
1. DNA 快速酶切流程
①在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:
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名称 |
质粒DNA |
PCR产物 |
基因组DNA |
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ddH2O |
15μL
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16μL
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30μL
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10× EZ Buffffer 或 10× EZ Color Buffffer
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2μL
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3μL
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5μL
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底物 DNA
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2μL (up to 1μg)
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10μL (0.2μg)
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10μL (5μg)
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LightSpeed 系列 SmaI
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1μL
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1μL
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5μL
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Total
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20μL
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30μL
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50μL
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注:本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度,10× EZ Buffer 加入量可适当减少至 2μL。但由于 DNA 聚合酶 同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。
②轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
③37℃温育 15分钟(质粒),或 15-30 分钟(PCR 产物),或 30-60 分钟(基因组 DNA);
注:37℃反应时酶活性会略降低,需适当延长温育时间。
④80℃温育 20分钟即可使酶失活,停止反应(可选)。
2. 双酶切或多酶切
①每种快速内切酶的用量为 1μL,并根据需要适当扩大反应体系;
②所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10;
③如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。
3. 适用于质粒的扩大反应体系
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DNA
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1μg
3μg 4μg 5μg
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2μg
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3μg
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4μg
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5μg
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LightSpeed 系列 SmaI
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1μL
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2μL
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3μL
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4μL
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5μL
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10× EZ Buffffer 或 10× EZ Color Buffffer
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2μL
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2μL
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3μL
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4μL
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5μL
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Total
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20μL
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20μL
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30μL
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40μL
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50μL
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注:如果总反应体系大于 20μL,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
注意事项
1.内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存;
2.甘油含量大于5%,低盐浓度,pH>8.0或酶大大过量(约20倍以上)可能会导致星号活性,即产生非特异性酶切;
3.本产品仅供科研使用,请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途;
4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。